Uso de fluorescência em um método de dissector modificado para estimar o número de miócitos no tecido cardíaco / Use of fluorescence in a modified disector method to estimate the number of myocytes in cardiac tissue / Uso de fluorescencia en un método de disector modificado para estimar el número de miocitos en el tejido cardíaco

FUNDAMENTO: Métodos convencionais de dissector atualmente requerem consideráveis custos financeiros, técnicos e operacionais para estimar o número de células, incluindo cardiomiócitos, em uma área de 3D. OBJETIVO: Usar a microscopia de fluorescência em um método de dissector modificado para determinar o número de miócitos no tecido cardíaco em condições normais e patológicas. MÉTODOS: O estudo empregou camundongos Wistar machos com quatro meses de idade e peso de 366,25 ± 88,21 g randomizados em grupos controles (GC, n = 8) e infectados (GI, n = 8). Os animais do GI foram inoculados com cepa Y de T. cruzi (300.000 tripomastigotas/50 g). Após oito semanas, os animais foram pesados e sacrificados. Os Ventrículos Esquerdos (VE) foram removidos para análise estereológica da densidade numérica de cardiomiócitos (Nv [c]) e o número total dessas células no VE (N [c]). Esses parâmetros foram estimados usando um dissector fluorescente (DF) e comparados com os métodos convencionais de dissector óptico (DO) e dissector físico (DFi). RESULTADOS: Em ambos os métodos de dissector, os animais do GI apresentaram queda significativa de Nv[c] e N[c] em comparação com os animais do GC (P > 0,05). Uma correlação forte, igual ou superior a 96%, foi obtida entre DF, DO e DFi. CONCLUSÃO: O método DF parece ser igualmente confiável para determinar Nv[c] e N[c] em condições normais e patológicas, apresentando algumas vantagens em relação aos métodos convencionais de dissector: redução de cortes histológicos e imagens na análise estereológica, redução do tempo de análise das imagens, a construção de DF em microscópios simples, utilizando o modo de epifluorescência, distinção de planos de dissector em ampliações inferiores.

BACKGROUND: Conventional disector methods currently require considerable financial, technical and operational costs to estimate the number of cells, including cardyomyocytes, in a 3D area. OBJECTIVE: To use fluorescence microscopy in a modified disector method to determine the number of myocytes in cardiac tissue in normal and pathological conditions. METHODS: The study employed four-month-old male Wistar rats with weight of 366.25 ± 88.21g randomized in control (CG, n=8) and infected (IG, n=8) groups. IG animals were inoculated with T. cruzi Y strain (300,000 trypomastigotes/50g wt). After eight weeks, the animals were weighted and euthanized. The left ventricles (LV) were removed for stereological analysis of numerical density of cardiomyocytes (Nv[c]) and total number of these cells in the LV (N[c]). These parameters were estimated using a fluorescent disector (FD) and compared with the conventional optical (OD) and physical (PD) disector methods. RESULTS: In both disector methods, IG animals presented significant decrease of Nv[c] and N[c] compared to CG animals (P< 0.05). There was no significant difference in these variables despite the disector method applied in CG and IG animals (P> 0.05). A strong correlation, equal or above 96%, was obtained between FD, OD and PD. CONCLUSION: The FD method seems to be equally reliable to determine Nv[c] and N[c] in normal and pathological conditions and presents some advantages compared to conventional disector methods: reduction of histological slices and images in the stereological analysis, reduction of time to analyze the images, construction of FD in simple microscopes using the epifluorescence mode, distinction of disector planes in lower magnifications.

FUNDAMENTO: Métodos convencionales de disector actualmente requieren considerables costos financieros, técnicos y operativos para estimar el número de células, incluyendo cardiomiocitos, en un área de 3D. OBJETIVO: Usar la microscopia de fluorescencia en un método de disector modificado para determinar el número de miocitos en el tejido cardíaco en condiciones normales y patológicas. MÉTODOS: El estudio empleó ratones Wistar machos de cuatro meses de edad y peso de 366,25 ± 88,21 g randomizados en grupos controles (GC, n = 8) e infectados (GI, n = 8). Los animales del GI fueron inoculados con cepa Y de T. cruzi (300.000 tripomastigotas/50 g). Después de ocho semanas, los animales fueron pesados y sacrificados. Los Ventrículos Izquierdos (VI) fueron removidos para análisis estereológico de la densidad numérica de cardiomiocitos (Nv [c]) y el número total de esas células en el VI (N [c]). Esos parámetros fueron estimados usando un disector fluorescente (FD) y comparados con los métodos convencionales de disector óptico (OD) y disector físico (PD). RESULTADOS: En ambos métodos de disector, los animales del GI presentaron caída significativa de Nv[c] y N[c] en comparación con los animales del GC (P > 0,05). Una correlación fuerte, igual o superior a 96%, fue obtenida entre FD, OD y PD. CONCLUSIÓN: El método FD parece ser igualmente confiable para determinar Nv[c] y N[c] en condiciones normales y patológicas, presentando algunas ventajas en relación a los métodos convencionales de disector: reducción de cortes histológicos e imágenes en el análisis estereológico, reducción del tiempo de análisis de las imágenes, la construcción de FD en microscopios simples, utilizando el modo de epifluorescencia, distinción de planos de disector en ampliaciones inferiores.

Quantification of argyrophillic, argentaffin and insulin immunoreactive cells in the small intestine in the opossum Didelphis aurita (Wied-Neuwied, 1826) / Quantificação das células argirófilas, argentafins e imunorreativas à insulina nos diferentes segmentos do intestino delgado do gambá Didelphis aurita (Wied-Neuwied, 1826)

The objective of this study was to quantify argyrophillic, argentaffin and insulin immunoreactive endocrine cells in the different segments of the small intestine of Didelphis aurita and measure probable differences in the number of these cells between adult and post-pubertal animals. Biological material consisted of ten male and female opossums specimen, divided in two groups according to weigh. The utilized staining techniques were Grimelius, modified Masson-Fontana and direct immunoperoxidase. Results indicated a predominance of argyrophillic cells in the small intestine of opossums from class 1 and 2, with an average of 52.58 and 56.15 cells mm-2, respectively; of which, the average number of total endocrine cells, argyrophillic and argentaffin cells decreased distally in the intestinal segments of opossums from classes 1 and 2. No significant difference was observed for the insulin immunoreactive cells between the intestinal segments of animals from class 2. A greater number of insulin immunoreactive cells was encountered in the jejunum and ileum of animals from class 2 when compared to the same segment in animals from class 1.

Os objetivos deste trabalho foram quantificar as células endócrinas argirófilas, argentafins e imunorreativas à insulina nos diferentes segmentos do intestino delgado de gambás Didelphis aurita e mensurar prováveis diferenças no número destas células entre animais adultos e pós-púberes. Dez exemplares de gambás D. aurita machos e fêmeas foram divididos em dois grupos de acordo com o peso. As técnicas de coloração utilizadas foram Grimelius, Masson-Fontana modificado e Imunoperoxidase direta. Os resultados indicaram um predomínio das células argirófilas no intestino delgado de gambás da classe 1 e 2, com uma média de 52,58 e 56,15 células mm-2, respectivamente. O número médio de células endócrinas totais, células argirófilas e argentafins decresceu distalmente nos segmentos intestinais dos gambás das classes 1 e 2. Nenhuma diferença significativa foi observada para as células imunorreativas à insulina entre os segmentos intestinais dos animais da classe 2. Foi encontrado maior número de células imunorreativas à insulina no jejuno e íleo de animais da classe 2 quando comparado ao mesmo segmento em animais da classe 1.

Influência do laser arseneto de gálio-alumínio em feridas cutâneas de ratos / Influence of gallium-aluminum arsenide laser in the cutaneous wounds in wistar rats

Objetivo: O presente estudo avaliou o efeito do laser arseneto de gálio-alumínio (GaAsAl) 830nm(30j/cm²) e da pomada Dersani® no processo cicatricial cutâneo de ratos wistar, em relação à proliferação fibroblástica e revascularização. Material e métodos: Foram utilizados 18 ratos wistar adultos jovens, machos, com peso médio de 324 g, provenientes do Biotério do Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Viçosa. Foram feitas cinco feridas de 12 mm no dorso dos animais utilizando bisturi. Os animais foram divididos aleatoriamente em três grupos, cada grupo com seis animais: Grupo 1: Controle - os animais tiveram a ferida tratada com salina, Grupo 2:Feridas tratados com laser GaAsAl (830nm) 30J/cm² e Grupo 3: Feridas tratadas com Dersani®. As aplicações foram feitas diariamente durante 20 dias de experimento. O material para análise histológica foi corado com hematoxilina-eosina (HE), fotografados e analisados por meio do programa Image Pro-plus®, por contagem de pontos sob células de interesse. Resultados: Foi observado maior número de fibroblastos nos grupos tratados com o laser GaAsAl e com a pomada Dersani®, quando comparados ao controle no quarto dia do experimento. No entanto, no oitavo dia o grupo tratado com laser apresentou um número significativamente menor de fibroblastos, quando comparado ao controle e ao Dersani®. Em relação à revascularização foi observada diferença significativa entre o laser e o Dersani® no oitavo dia de experimento, em que o Dersani® se mostrou mais efetivo na formação de vasos sanguíneos. Conclusão: O grupo tratado com o laser GaAsAl no quarto dia aumentou significativamente a quantidade de fibroblastos quando comparado ao controle.

Objective: The present work evaluates the effect of the gallium-aluminum arsenide (GaAsAl) (30j/cm²) laser and ointment DersaniTM, on the cutaneous cicatricial process the wistar rats, in respect of fibroblast proliferation and revascularization. Materials and methods: The study made use of 18 wistar rats, young adults, males, with medium weight of 324 g, from the animal house of Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (Health and Biological Sciences Center) of Universidade Federal de Viçosa, MG, Brazil. Five 12 mm wounds were made in the dorsal region of the rats using scalpel blades. Animals were separated in 3 groups, each one with six animals. Group 1: Control - Animals had the wound treated with saline; Group 2: Wound treated with GaAsAl (30J/cm²) laser; and Group 3: wound treated with DersaniTM. The applications were made daily during 20 days of experiment. The material for histological analyses was stained with hematoxilin-eosin (HE), photographed and analyzed using the program Image Pro-plusTM through enumeration of points under the cells of interest. Results: It was observed an increase in the number of fibroblasts in the groups treated with GaAsAl 30J/cm² and with DersaniTM ointment when compared to controls in the fourth day of experiment. However, in the eighth day the group treated with laser presented a significant reduced number of fibroblasts when compared to control and DersaniTM groups. In relation to revascularization, significant differences between laser and DersaniTM were observed in the eighth day of the experiment, where to DersaniTM showed to be more effective in the formation of blood vessels. Conclusion: The group GaAsAl laser on the fourth day, there was a significantly greater quantity of fibroblasts compared to control group.

Flaxseed, olive and fish oil influence plasmatic lipids, lymphocyte migration and morphometry of the intestinal of Wistar rats / Óleo de linhaça, oliva e peixe influenciam os lipídios plasmáticos, migração de linfócitos e morfometria intestinal de ratos Wistar

PURPOSE: Evaluate the effect of flaxseed, olive and fish oil on the lipid profile, preservation of villosities and lymphocyte migration in the intestinal mucosa of Wistar rats. METHODS: Thirty Wistar male rats were divided into four groups, which received the AIN-93M diet, with changes only to their lipid source: flaxseed, olive, fish, and soy oil (control group). The serum was separated for the biochemical parameter analysis. A histological evaluation was performed in the ileal portion. RESULTS: The group which was fed fish oil presented lower values when compared to the other treatments for Total Cholesterol, High-density Lipoprotein Cholesterol and Triacylglycerol (p<0.05). The animals treated with fish and olive oils presented better intestinal villosities preservation. Less deposition of lymphocytes was observed in the flaxseed group (p<0.001). CONCLUSIONS: This study demonstrated that flaxseed, olive and fish oils present different responses than soy oil for the intestinal mucosa preservation and lymphocyte proliferation in Wistar rats.

OBJETIVO: Avaliar o efeito dos óleos de linhaça, oliva e peixe no perfil lipídico, preservação das vilosidades e migração de linfócitos na mucosa intestinal de ratos Wistar. MÉTODOS: Trinta ratos Wistar foram divididos em quarto grupos e receberam dieta AIN-93M, modificando para cada grupo apenas a fonte lipídica: óleo de linhaça, oliva, peixe e soja ( grupo controle). O soro foi separado para análise dos parâmetros bioquímicos. A análise histológica foi realizada na porção ileal. RESULTADOS: O grupo que recebeu óleo de peixe apresentou menores valores de colesterol total, lipoproteína de alta densidade e triacilglicerol (p<0.05). Os animais tratados com óleo de peixe e oliva apresentaram melhor preservação das vilosidades intestinais. Menor deposição de linfócitos foi observado no grupo tratado com óleo de linhaça (p<0.001). CONCLUSÃO: Este estudo demonstrou que os óleos de linhaça, oliva e peixe apresentam diferentes respostas em relação ao óleo de soja na preservação da mucosa intestinal e proliferação de linfócitos em ratos Wistar.

Influência do laser arseneto de gálio e arseneto de gálio-alumínio e pomada cicatrizante sobre leucócitos sanguíneos de ratos Wistar após lesão cutânea / Influence of the gallium arsenide laser and gallium aluminum arsenide laser and healing ointment on blood leukocytes in Wistar rats after cutaneous lesion

O presente estudo avaliou os efeitos do laser arseneto de gálio-alumínio (GaAsAl), do laser arseneto de gálio (GaAs) e pomada cicatrizante DersaniÒ sobre leucócitos sanguíneos após realização de feridas cutâneas em ratos Wistar. Os parâmetros analisados foram os valores hematológicos dos animais. Foram utilizados 30 ratos Wistar, adultos jovens, machos, provenientes da Universidade Federal de Viçosa. Cinco feridas de 12 mm foram feitas na região dorsal do ratos. Os animais foram separados em 5 grupos, com 6 animais cada. Grupo 1: animais tratados com o laser GaAs (4J/cm2), grupo 2: laser GaAsAl (30J/cm2), grupo 3: laser GaAsAl (60J/cm2), grupo 4: foi usada pomada DersaniÒ grupo 5: solução salina (controle). As aplicações foram feitas diariamente durante 20 dias. Foi coletado sangue no primeiro e último dia do experimento e foi armazenado com anticoagulante. A contagem global de leucócitos foi feita utilizando câmera de Neubauer. A contagem diferencial foi feita através de esfregaço após coloração com Giemsa. A contagem global de leucócitos nos diferentes tratamentos não apresentou diferença significativa, exceto nos animais tratados com DersaniÒ em que houve aumento significativo no número de monócitos. Os tratamentos com salina e Laser GaAsAl 30J/cm2 também apresentaram aumento no número de neutrófilos.

This study evaluated the effect of the gallium aluminum arsenide laser (GaAsAl), gallium arsenide laser (GaAs) and healing ointment Dersani® on blood leukocytes after performing cutaneous incision in Wistar rats. The analyzed parameters were the hematological values of the animals. 30 Wistar rats, young, adults, males, from Federal University of Viçosa, MG were used. Five incisions (12 mm long) were made in the dorsal region of the rats. The animals were divided into five groups, with six animals each. Group 1: animals treated with the GaAs laser (4J/cm2); Group 2: GaAsAl laser (30 J/cm2); Group 3: GaAsAl laser (60 J/cm2); Group 4: the DersaniÒ ointment was used; Group 5: saline solution (control). Therapy was applied daily for a period of 20 days. Blood samplings were carried out on the first and last day of the experiment and stored with anticoagulant. Total leukocytes count was performed using a Neubauer camera. Differential counts of Giemsa-stained smears were made. Total leukocytes count did not show significant difference in any treatment, except in the animals treated with Dersani® that a significant increase in monocytes number was found. The treatment with saline and the GaAsAl (30 J/cm2) laser showed also an increase in the number of neutrophils.

Ultrastructural, histological and histochemical characteristics of the epithelial wall of the seminal vesicle of mature Scaptotrigona xanthotricha moure males (Hymenoptera, apidae, meliponini)

The seminal vesicles of mature Scaptotrigona xanthotricha males were investigated using light microscopy, histochemistry and transmission electron microscopy. The globular seminal vesicles were ~450 ìm in diameter and consisted of a sperm-filled lumen and a single layer of epithelium surrounded externally by a muscular sheath. The mitochondria-rich epithelial cells had many inclusions in the basal region. These inclusions were relatively large and contained membranous structures similar to myelin figures. The epithelial cells of the seminal vesicle showed none of the features characteristically associated with a secretory function, which suggested that the material in which the spermatozoa were immersed in the vesicle lumen was produced elsewhere along the ducts and/or during sexual maturation of the males. Spermatozoa were occasionally seen inside the inclusions, which suggested a possible spermiophagic activity for this epithelium.

Fmrfamide-like immunoreactive midgut endocrine cells in different castes of the bee Melipona quadrifasciata anthidioides (apidae; meliponini)

FMRFamide-like immunoreactive cells have been identified in almost all insect species studied. However, the functions of this peptide are still unknown, although several studies have suggested that FMRFamide may play a role in controlling peristalsis, digestion, development and reproduction in insects. Differences in the number, morphology, and distribution of FMRFamide-like cells have been observed among insects. Social bees are characterized by the presence of well-defined castes, each with a different behavior, energy demand and nutrient consumption. In this work, we used immunofluorescence to assess the number, morphology,and distribution of FMRFamide-like immunoreactive cells in different castes of the bee Melipona quadrifasciata anthidioides. These immunoreactive cells were observed only in the posterior region of the midgut, whereas FMRFamide-immunoreactive nerve fibers were more abundant in the fore-and hind-midgut boudary . However, htere were no differences in the number and distribution of FMRFamide-like cells among the castes. This localization of immunoreactivity may indicate that the nervous system controls the passage of food through the cardiac and pyloric valves, while the passge of food through the midgut is controlled by midgut endocrine cells. The number, morphology and distribution of midgut FMRFamide-like cells were not influencend by behavior, feeding habits, cast, or sex in this species.